Возможности использования тело-меразной активности в оценке тем­пов роста миомы матки

По данным литературы, в основе развития миомы матки происходит снижение апоптоза, в результате чего биологически нецелесообраз­ные клетки не устраняются, а накапливаются. Многочисленные перенесенные и сопутствующие гинекологические и соматические заболевания, которые суммируются с возрастом, обусловли­вают соматическую мутацию клеток и наруше­ние экспрессии генов индукторов и ингибиторов апоптоза и пролиферации (Troiano and Flegal, 1999; Samadi et al., 1996; Parazzini et al., 1988).

На основании особенностей гистологиче­ского строения лейомиом выделены три раз­новидности в морфогенетическом отношении: простые лейомиомы, развивающиеся по типу доброкачественных мышечных (контролируе­мых) гиперплазий; пролиферирующие лейо-миомы, обладающие морфогенетическими кри­териями истинной доброкачественной опухоли миометрия; и предсаркомы, относящиеся к про­межуточному (пограничному) этапу на пути истинной малигнизации, но не обязательно пре­вращающиеся в саркому.

Простая миома матки, возникая как моно-клональная опухоль, постепенно увеличива­ется в размерах за счет снижения апоптоза и возрастания массы соединительнотканного компонента (фибробластов и внеклеточного матрикса). Недостаточное развитие сосудов сопровождается вторичными изменениями в узлах простой миомы (ложный рост опухоли). Пролиферирующая миома матки развивается не только за счет низкого апоптоза, но и за счет активации пролиферативных процессов, так называемый истинный рост опухоли. Простая миома матки в процессе своего существования может принять пролиферирующий характер, если длительно воздействуют факторы сома­тической мутации клеток или другие внешние и внутренние стимулы роста (Сидорова И. С., Мамедбекова Р. Б., 2003).

Теломераза - фермент, компенсирующий укорочение эукариотических хромосом, утра­ченных в ходе репликации теломерных повто­ров. Она состоит из каталитической субъеди­ницы (h-TERT - telomerase reverse transcriptase) (Kilian A., et al. 1997, Nakamura T. M. et al. 1997), РНК-субъединицы (hTR), выполняющей роль матрицы при наращивании ДНК, и ассоцииро­ванных белков. Теломеразная активность (ТА) сохраняется в тканях с высоким уровнем про­лиферации: в стволовых клетках, лимфоцитах, семенниках, яичниковых фолликулах, эндо­метрии, коже, волосяных фолликулах, эндоте-лиальных клетках (M. Jean-Louis, 2002). Она активна в период развития зародыша, но затем в большинстве соматических клеток происходит инактивация этого фермента (W. E. Wright, 1996, 2001; CM Counter, 1994).

Учитывая вышеизложенное, целью данного исследования явилось изучение роли активно­сти фермента теломеразы, показателя актив­ности пролиферативных процессов, в тканях миоматозных узлов при различном морфологи­ческом типе миом.

Материалом для исследования служили эндо­метрий (9), кусочек миоматозного узла (17) и прилежащий кусочек миометрия (17), взятые у 17 пациенток во время оперативного вмеша­тельства. Возраст больных на момент хирур­гического лечения составил в среднем 36,7±1,2 лет. Показанием для оперативного лечения в 16 случаях явилась миома матки больших разме­ров, из них у 1-й пациентки была миома матки гигантских размеров, отмеченный рост узлов миомы и рецидив заболевания выявлены у 3-х пациенток. Миомэктомия лапароскопическим доступом выполнена у 11 пациенток, у 6 боль­ных - путем чревосечения. Из них, миомэктомия со вскрытием полости матки была в 4-х случаях. 1-й пациентке оперативное лечение выполнено в объеме гистерэктомии без придатков матки.

Исследуемый материал делили на две части - одну часть подвергали гистологическому иссле­дованию, вторую помещали в пластиковые про­бирки, немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при температуре -70 градусов по Цельсию до получения гистологического диа­гноза. Соответственно гистологическому заклю­чению лейомиому матки делили на простую (12) и клеточную (4), выделяли эндометрий фазы пролиферации (4) и фазы секреции (5).

Определение ТА проводилось с помощью метода TRAP (Telomeric Repeat Amplification Protocol), предложенного Кимом и соавт. с некоторой модификацией А. И. Глухова. Данный метод основан на ПЦР-амплификации продук­тов теломеразной реакции, полученных при удлинении ферментом специфического прай-мера. Положительным контролем служил экс­тракт из опухолевой клеточной линии К 562 (хроническая миелогенная лейкемия).

Большинство соматических клеток человека не экспрессируют теломеразу и имеют ограни­ченный репликативный период. Этот встроен­ный механизм, как полагают, защищает против развития опухолей ограничением пролифера­ции, необходимой для развития клональных опухолей. Наличие ТА обеспечивает преодоле­ние этого репликативного блока. Последующая активация теломеразы обеспечивает экспансию возникших в результате клеток.

При исследовании эндометрия всех 9 образ­цов интенсивность свечения TRAP фрагментов в разведении белка 8 мкг/мкл-0,7 мкг/мкл ТА была положительной, и разница ее в зависимо­сти от фазы менструального типа не обнаружена.

Все образцы миометрия были негативны по активности телометразы. Однако в одном случае был выявлен слабый сигнал ТА во фрагменте миоматозного узла. Это была лейомиома матки с отеком, очагами клеточного строения, скле-розированными сосудами синусоидного типа. Интерпретация данного случая противоречива, так как данный образец был получен во время лапароскопической миомэктомии со вскрытием полости матки, а миоматозный узел был с субму-козным расположением. Этот результат можно считать ложноположительным. Возможно, вме­сте с фрагментом узла миомы был взят и эндо­метрий, а он, как известно, имеет повышен­ную активность теломеразы. Наши результаты согласуются с данными Kyo с соавторами (1996), проводившими анализ 9 доброкачественных опухолей миометрия на наличие ТА, обнару­жившими, что все образцы были негативны, за исключением одного случая миомы, которая имела слабый сигнал.

Таким образом, анализ полученных в ходе работы результатов дает основание для даль­нейшего изучения ТА при лейомиомах, с целью выявления пролиферативной активности тканей. Результаты проведенных исследований могут послужить дифференциально-диагностическим критерием миомы, обусловленной пролифера­цией гладкомышечных клеток или «ложной», связанной с повышенной фибриллообразова-тельной функцией гладкомышечных клеток и дегенеративными изменениями в узле опухоли.